原代細胞傳代方法哪有幾種?

原代細胞是指從(cong) 機體(ti) 的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經蛋白酶或其它的方法獲得單個(ge) 細胞並在體(ti) 外進行模擬機體(ti) 培養(yang) 的
細胞,稱為(wei) 原代細胞。
-般認為(wei) ,培養(yang) 的原代的第1代細胞和傳(chuan) 代到第10代以內(nei) 的細胞統稱為(wei) 原代細胞培養(yang) 。在人工條件下使其原代細胞生存、生長、繁殖和傳(chuan)
代,進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞I程等問題的研究。
那麽(me) 關(guan) 於(yu) 原代細胞的傳(chuan) 代培養(yang) ,我們(men) 應該怎麽(me) 做呢?一般有以下兩(liang) 種方法:
一、貼壁細胞的消化法傳(chuan) 代
1、吸除或倒掉瓶內(nei) 舊培養(yang) 液。
2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與(yu) EDTA混合液)輕輕搖動培養(yang) 瓶,使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鍾後把培養(yang) 瓶放置在顯微鏡下進行觀察,發現原貼壁的細胞逐漸趨於(yu) 圓形,在還未漂起時,棄去消化液,加入培養(yang) 液終止消
化。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸波,分別接種到另外兩(liang) 到三個(ge) 培養(yang) 瓶中,置37°C培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。第二天觀察貼壁生長情況。
二、懸浮細胞的傳(chuan) 代
1、直接傳(chuan) 代
①讓懸浮細胞慢慢沉澱在瓶底後,將上清吸掉1/2-2/3.
②用吸管吹打形成細胞懸液後,分別接種到另外兩(liang) 到三個(ge) 培養(yang) 瓶中，置37*C培養(yang) 箱中培養(yang) 。
2、離心法傳(chuan) 代
①將細胞連同培養(yang) 液一並轉移到離心管內(nei) ,離心800-1000rpm , 5分鍾。
②去除上清,加新的培養(yang) 液到離心管內(nei) ,用吸管吹打使之形成細胞懸液。
③將細胞懸液分別接種到另外兩(liang) 到三個(ge) 培養(yang) 瓶中,置37*C培養(yang) 箱中培養(yang) 。