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H22（小鼠肝癌細胞）分離自小鼠腹水，由大連醫科學院建立。在實驗研究中，常將H22細胞接種於(yu) 小鼠皮下，建立異位移植模型，廣泛用於(yu) 抗腫瘤藥物藥效學初步篩選。
H22細胞基礎信息
生長特性：
懸浮細胞
細胞形態：
淋巴母細胞樣
生長培養(yang) 基：
RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
推薦傳(chuan) 代比例：
3×10^5-5×10^5cells/mL
推薦換液頻率：
2~3次/周
凍存液：
55% 基礎培養(yang) 基+40%FBS+5%DMSO
培養(yang) 條件：
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
腹水傳(chuan) 代培養(yang)
了解完H22細胞的基礎信息，我們(men) 就可以著手準備細胞培養(yang) 了。普諾賽已經為(wei) 大家總結好了詳細的腹水傳(chuan) 代步驟，希望能對大家有所幫助!
1
H22體(ti) 外培養(yang) 至合適密度後，離心（1200r/min,3min）收集細胞，用PBS重懸備用；
2
取0.2mL培養(yang) 好的細胞計數（細胞密度為(wei) 1*10^7/mL）後，腹腔注射至小鼠腹腔；
3
飼養(yang) 5-6天，小鼠腹水可收集（4-8mL）；
4
采用無菌抽取或解剖收集腹水後，用PBS稀釋2倍後離心（1200r/min,3min），去上清，重複洗滌過程1-2次，加入10mLPBS重懸製備成細胞懸液備用；
5
取50mL離心管加入10mL小鼠外周血淋巴細胞分離液，上層加入10mL細胞懸液，離心收集沉澱（2000r/min,10min）,重複2-3次；
6
將收集的沉澱用1640培養(yang) 基重懸，接種於(yu) T175培養(yang) 瓶中，接種密度為(wei) 4*10^5 /mL，放置培養(yang) 箱培養(yang) 8-12h；
7
收集細胞懸液離心（1200r/min,3min），用程序凍存液將細胞凍存，凍存密度為(wei) 10^7/mL。
注意事項
掌握以上培養(yang) 步驟就一定可以培養(yang) 好細胞嗎？你還需要掌握以下這些注意事項 ：
1
新手可以選擇處死小鼠，然後先用注射器吸出一些細胞，再剪開腹腔，用槍吸出剩下的；熟練了可以不處死小鼠，直接注射器插進去吸，小鼠還能重複接種；
2
注意不要戳破內(nei) 髒，否則容易造成細胞交叉汙染；
3
小鼠飼養(yang) 時間控製在5天為(wei) 佳。時間過長，小鼠會(hui) 死亡或收集的腹水中紅細胞含量過高；
4
複蘇之後會(hui) 有死細胞，但不影響正常腹水的產(chan) 生；
5
H22細胞體(ti) 外培養(yang) 增殖幾代就需要腹水培養(yang) 一次，否則細胞狀態會(hui) 急速變差，碎片增多。做實驗需提前擴增至所需的細胞量然後凍存起來，長期培養(yang) 需5代內(nei) 腹水培養(yang) 一次；
6
中間每一次傳(chuan) 代可以先離心，PBS或生理鹽水重懸後打給下一隻;
7
收集腹水紅細胞過多時，可以用紅細胞裂解液去除；
8
用分離液分離細胞時，可多次分離篩選，保證細胞的純度；
9
凍存細胞最好分離出來後培養(yang) 8個(ge) 小時左右再凍存，可以有效去除可能沒有篩出去的血紅細胞，還可以讓細胞的狀態調整至最佳；
10
細胞活力不一樣、接種細胞量不一樣，腹水長出的時間就不一樣。接種是否成功可以通過觀察老鼠的狀態來確定，接了腹水的老鼠活動力會(hui) 變弱。
常見問題及解答
關(guan) 於(yu) H22細胞腹水傳(chuan) 代，普諾賽將大家疑問較多的問題，總結如下。
01
H22腹水傳(chuan) 代可以用哪些小鼠？
可以用balb/c小鼠、Km小鼠等，體(ti) 重在20g左右。
02
H22細胞收貨有哪些注意事項？
到貨後，請將細胞瓶豎立著靜置2~4h，然後把瓶中培養(yang) 基上麵部分培養(yang) 基小心吸出，留底部細胞和3mL左右培養(yang) 基在原瓶。吸出的細胞離心收集細胞沉澱，離心轉速1200轉3分鍾。
03
為(wei) 什麽(me) 剛到貨的H22細胞會(hui) 出現細胞聚團？
懸浮細胞發貨時密度不能太低，因路上運輸，狀態不穩定，剛到貨時可能會(hui) 出現聚團的情況。待穩定培養(yang) 幾天，聚團會(hui) 消失，需要注意培養(yang) 時少動細胞，以免損傷(shang) 細胞。
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