原代細胞分離提取的注意事項

　　原代細胞分離是指將組織分散製成細胞懸液後從(cong) 中獲取目的細胞的過程，獲得高純度、高活性的原代細胞則是很多細胞實驗成功的關(guan) 鍵要素之一，但是，很多小夥(huo) 伴會(hui) 在這個(ge) 關(guan) 鍵步驟會(hui) 出現問題，今天我們(men) 就主要來聊聊這個(ge) 問題。

　　首先，原代細胞分離的方法有很多種：

　　原代細胞是直接取自活組織(例如活組織檢查材料)的細胞，並建立用於(yu) 體(ti) 外生長。這些細胞經曆了非常少的群體(ti) 倍增，因此與(yu) 連續(腫瘤或人工永生化)星空体育平台官网网址相比，它們(men) 更能代表它們(men) 所衍生組織的主要功能成分，使得原代細胞成為(wei) 更具代表性的體(ti) 內(nei) 模型。

　　所以，自己動手分離原代細胞，是非常有必要的。

　　原代細胞分離方法有許多種：懸浮離心法、直接組織塊法、酶消化法、非酶消化法、機械分散法等，今天，我們(men) 主要來看看最-常用的方法——酶消化法。

　　原代細胞分離提取優(you) 化七步法

　　1、無菌

　　確保使用無菌設備、試劑和技術收集和處理組織。使用個(ge) 人防護設備以避免汙染。使用0.22微米的膜無菌過濾所有酶和試劑。

　　2、切塊

　　用無菌剪刀或手術刀將組織標本切成小塊(通常為(wei) 2×4mm)，然後將小塊放入選定的緩衝(chong) 液、培養(yang) 基或鹽溶液中。

　　3、加酶

　　將組織清洗三次以消除多餘(yu) 的血液蛋白，然後加入您選擇的酶如膠原酶、蛋白酶、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶。通常，約0.5 mg/ml～1.5 mg/ml的酶。

　　4、孵育

　　將組織樣本在其最佳溫度下孵育，通常在37℃下孵育30～90分鍾。定期混合或輕輕搖動標本。

　　5、洗滌

　　通過輕輕移液來分散細胞(也稱為(wei) 研磨)，然後，使用細網過濾細胞懸浮液。讓細胞沉澱並潷出多餘(yu) 的含液酶;洗兩(liang) 到三次。含有FBS，BSA或其他抑製劑的洗滌溶液也可用於(yu) 阻止酶消化。

　　6、分析

　　將細胞重懸於(yu) 正確的培養(yang) 基或緩衝(chong) 液中，然後定量測定細胞產(chan) 量和活力。這是細胞分離過程中的重要步驟，因此您可以評估解離技術的結果。大多數研究人員使用血細胞計數器測定細胞產(chan) 量，並使用台盼藍重氮染料測量細胞活力。

　　7、培養(yang)

　　這個(ge) 適合，就可以根據所分離的細胞來選擇最-適合研究的方案和處理步驟來培養(yang) 細胞了。

　　重點注意事項：

　　1、使用細胞分離酶時，請注意溫度和濕度條件。如蛋白水解酶可以自動分解，因此建議在使用前立即將其溶解，並在冰上保存2°C～8°C。

　　2、通常用於(yu) 細胞分離的大多數酶可以直接溶解於(yu) 平衡鹽溶液或所選緩衝(chong) 液中。對於(yu) 許多細胞分離中，確保解離期間的組織存活，需要孵育培養(yang) 基充分氧化並在生理pH下緩衝(chong) 。95%O2、5%CO2平衡的介質來完成。