細胞學堂 | 脫落的293T細胞如何恢複正常
更新時間：2023-02-16 | 點擊率：1148
293T [HEK-293T](人胚腎細胞)是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株。該細胞廣泛應用於(yu) 病毒包裝，因其比較容易轉染，也是常用的表達研究外源基因的細胞株。
該細胞因為(wei) 貼壁鬆散，若購買(mai) 常溫細胞，收貨時有可能大部分細胞脫離培養(yang) 瓶壁，顯微鏡下找不到細胞，隻能看到肉眼可見的細胞團，是正常現象（如圖2）。
圖2. 293T收貨聚團（圖由客戶提供，僅(jin) 供學習(xi) 參考）
收到細胞後請先置於(yu) 培養(yang) 箱中穩定2 ~ 4h後再進行下一步處理，不建議放置培養(yang) 箱過夜後處理；
將培養(yang) 瓶內(nei) 所有培養(yang) 基轉入無菌離心管，1200rpm離心3min收集細胞；
去掉上清，用PBS重懸細胞（以手搖離心管的方式重懸，不要用移液槍吹），將細胞收集到一個(ge) 離心管中，再次1200rpm離心3min；
去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重懸細胞（還是以手搖離心管的方式混勻，不要吹細胞）, 放入培養(yang) 箱消化2min；
消化2min後，加入5mL完-全培養(yang) 基混勻終止消化，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散，1200rpm離心3min；
去掉上清，加入6mL左右細胞相應的完-全培養(yang) 基混勻，視細胞量決(jue) 定是1:2傳(chuan) 代-還是1:3傳(chuan) 代（由於(yu) 細胞運輸有損傷(shang) ，首-次傳(chuan) 代建議比平時養(yang) 密度稍高）；
顯微鏡下觀察細胞是否有分散成單顆現象，若有明顯很大的細胞團需要重複上述步驟二次消化；
第二天及時觀察細胞貼壁情況，若貼壁細胞量過多，造成細胞堆積，貼壁24h後再次傳(chuan) 代分瓶，若密度正常則繼續生長，不建議換液，貼壁48h後換液去掉不能貼壁的細胞。
培養(yang) 時可將培養(yang) 瓶/皿進行包被；
PBS潤洗時動作應緩慢，避免衝(chong) 走細胞；
細胞傳(chuan) 代第二天可能有輕微聚團現象，再長一天能長開，不建議傳(chuan) 代第二天換液，以免損失細胞。
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