如何培養原代小鼠骨髓間充質幹細胞？

　　小鼠骨髓基質係統內存在的小鼠骨髓間充質幹細胞是一種除造血幹細胞以外的、具有多向分化潛能的幹細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。那麽它是如何培育的呢？

　　
 

　　1、材料

　　

　　成年小鼠4隻、胎牛血清、L-DMEM、胰蛋白酶、PBS、Percool細胞分離液、雙抗、8%碳酸氫鈉溶液。

　　

　　2、儀器

　　

　　倒置顯微鏡、CO2恒溫培養箱、超淨工作台、生物顯微鏡、低溫高速離心機、無菌操作台、血球計數板、6孔培養板。

　　

　　3、方法

　　

　　骨髓收集→Percoll密度梯度離心法分離純化骨髓間充質幹細胞→貼壁培養→形態學觀察→原代培養細胞

　　

　　注：原代培養時胎牛血清比例可適當提升，可以提高細胞成活率。

　　

　　4、結果

　　

　　（1）骨髓間充質細胞的形態學觀察

　　

　　24h後就見有細胞貼壁，多數細胞呈圓形。72h後半量換液去除未貼壁細胞，此時貼壁的細胞為單個，形態大部分為圓形。第一次換液後5~7天可見由幾十個到數百個細胞組成的集落，細胞形態呈梭形、三角形、星形。原代培養10天左右，細胞快速增殖，每個集落中的細胞不斷增殖呈長梭形放射狀排列。培養2周左右，每個小集落形成約數百至上千個細胞的大集落，集落交界處出現重疊、融合。

　　

　　（2）骨髓間充質細胞的生長曲線

　　

　　生長曲線表明BMSCs的增殖能力很強，所測細胞在開始的前4天裏生長緩慢處於潛伏適應期，第5天開始迅速增長進入對數生長期，到第9天細胞數輕度上升，第10天達到頂點，生長速度減緩進入平台期。