細胞學堂 | 貼壁細胞6大培養難題原因和解決方法

更新時間：2023-03-24 | 點擊率：1612

貼壁細胞在培養(yang) 時要貼附於(yu) 培養(yang) （瓶）器皿壁上，細胞一經貼壁就迅速鋪展，然後開始有絲(si) 分裂，並很快進入對數生長期。

貼壁細胞因其培養(yang) 過程較為(wei) 繁瑣，所以培養(yang) 時更容易出現問題。以下總結了貼壁細胞培養(yang) 中常見的6種問題，並詳細介紹原因和解決(jue) 方法，若培養(yang) 時遇到這些情況，可參考對應解決(jue) 方法處理。

傳(chuan) 代後細胞全部飄起

解決(jue) 方法：檢查所使用的培養(yang) 基的顏色是否偏紫色（如圖1），檢查瓶蓋是否透氣，不透氣瓶蓋是否被擰鬆。

圖1. 培養(yang) 基顏色偏紫

通常培養(yang) 基偏堿，顏色就會(hui) 偏紫，主要是因為(wei) 培養(yang) 基裏的酚紅指示劑遇酸變黃、遇堿變紫，培養(yang) 基量太少，或培養(yang) 基存放時間太長時都會(hui) 變堿。建議配好完-全培養(yang) 基後分裝到50mL離心管並於(yu) 一周內(nei) 用完，量少時放到15mL離心管裏保存。

傳(chuan) 代後部分細胞漂浮

原因及解決(jue) 方法如下

傳(chuan) 代前細胞密度太大：一般細胞匯合度達到80%時可進行傳(chuan) 代操作，傳(chuan) 代密度需適中，傳(chuan) 代密度過高也會(hui) 導致傳(chuan) 代後漂浮；

細胞狀態不好：可通過提高血清比例、穩定培養(yang) 環境等方法進行改善；

吹打次數過多造成機械損傷(shang) ：輕柔吹打，細胞呈單顆粒時可停止吹打，吹打過程避免氣泡產(chan) 生；

培養(yang) 基更換後不適應：更換回原來的培養(yang) 基；或者與(yu) 原培養(yang) 基比例混合後使用，使細胞有個(ge) 適應期。

傳(chuan) 代後細胞變形

原因及解決(jue) 方法如下

1）變形，但細胞還在生長：可能是血清批次不一樣導致，血清成分複雜，不同批次和品牌間均存在成分差異，影響細胞狀態。建議使用同一批次血清，更換血清時需與(yu) 原血清比例混合後使用，使細胞有過渡期；

2）變形，但細胞不長，且碎片增多：可能傳(chuan) 代操作過程損傷(shang) ，常見於(yu) 消化不當，或者潛在支原體(ti) 等汙染導致細胞病態；消化時間根據每個(ge) 細胞的狀態來調整，消化過度或者消化不充分均會(hui) 對細胞造成影響；培養(yang) 過程應嚴(yan) 格無菌操作，實驗環境盡量潔淨，確保細胞無外源汙染。

細胞生長周期變慢，邊養(yang) 邊漂

原因及解決(jue) 方法如下

細胞傳(chuan) 代時密度太稀或太密：建議細胞密度達80%左右進行傳(chuan) 代，傳(chuan) 代密度適中，密度過低會(hui) 延長生長周期；

傳(chuan) 代操作不當：根據細胞特性決(jue) 定細胞消化時間，一般在顯微鏡下觀察細胞回縮變圓並有少量細胞脫落即可終止消化，難消化的細胞可分次消化，每次時間不超過5min；頻繁換液或者清洗細胞也會(hui) 導致細胞狀態變差，常規換液時間間隔為(wei) 2~3天。