歡迎來到星空体育平台官网登录網站！歡迎來到星空体育平台官网登录網站！
400-999-2100
原代細胞具有貼壁特殊性，因此在消化後轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yang) 板、共聚焦培養(yang) 皿等）時，常出現貼壁不牢的情況，因此我們(men) 需要對實驗器皿進行包被處理，以增強細胞的貼壁性。
本期細胞學堂將為(wei) 您詳述原代細胞培養(yang) 中的包被操作步驟及注意事項，讓您的實驗順暢無阻！
為(wei) 了適應不同實驗需求，需要對培養(yang) 器皿用不同的物質包被後使用，包被條件常選用膠原蛋白Ⅰ（12μg/mL）、多聚賴氨酸PLL（0.1mg/mL）和明膠（0.1%）三種，依據細胞種類而定。
NO、1
膠原蛋白Ⅰ
膠原蛋白Ⅰ是最常見的膠原蛋白，能促進細胞的貼壁和增殖，常用於(yu) 上皮細胞、肝細胞、肌細胞等原代細胞的培養(yang) ；
NO.2
多聚賴氨酸PLL
多聚賴氨酸是一種合成化合物，是帶正電荷的氨基酸，通過改變培育基質外表的電極來促進細胞貼壁，其包被的培養(yang) 板適用於(yu) 神經元細胞、神經膠質細胞及轉染星空体育平台官网网址的培養(yang) ；
NO.3
明膠
明膠來自於(yu) 膠原的高分子量水溶蛋白混合物，0.1％的明膠溶液常用於(yu) 包被培養(yang) 器皿以促進細胞貼壁。明膠包被板常用於(yu) 培養(yang) 正常或轉染細胞如血管內(nei) 皮細胞、心肌細胞、胚胎幹細胞、胰島細胞等。
1
準備器皿
取出無菌培養(yang) 器皿，如T25培養(yang) 瓶（以下以T25瓶為(wei) 例）；
2
加包被試劑
取出包被試劑，在超淨工作台內(nei) 用移液器吸取1-2mL，加入T25瓶內(nei) ，輕輕晃動瓶身，確保底部全部覆蓋液體(ti) （注：使用的包被試劑為(wei) 膠原蛋白Ⅰ或明膠時，1瓶可一次性加入5mL，同時包被5瓶，用5mL潤洗每瓶瓶底部後，每瓶均分1mL進行後續包被操作)；
3
放入培養(yang) 箱
將培養(yang) 瓶蓋好，放入37℃培養(yang) 箱。PLL包被需要靜置30-60min以上，膠原蛋白Ⅰ包被和明膠包被需要靜置1-2h以上；
4
吸取包被試劑
取出培養(yang) 瓶，吸出多餘(yu) 包被試劑（可留取下次使用，建議PLL試劑重複使用不超過2-3次，膠原蛋白Ⅰ和明膠重複使用不超過1次，多次使用會(hui) 增加汙染概率，減弱包被效果）；
5
靜置
將培養(yang) 瓶蓋好，放入37℃培養(yang) 箱（也可放4℃冰箱，保持無菌即可），靜置4-24h以上，確保培養(yang) 瓶底部幹燥、無液體(ti) 。包被完畢，培養(yang) 瓶一般可存放3-7天（常溫或4℃），建議3天內(nei) 使用，存放過久，包被效果可能失效；
6
清洗
取出包被好的培養(yang) 瓶，在超淨工作台內(nei) ，用PBS或培養(yang) 基清洗。PLL包被的培養(yang) 瓶需清洗2-3次，膠原蛋白Ⅰ和明膠包被培養(yang) 瓶則清洗1-2次即可；
7
包被完成
正常接種使用培養(yang) 瓶。
01
包被試劑的保存：無菌多聚賴氨酸PLL（0.1mg/mL）需要4℃下保存，可保存三個(ge) 月；無菌膠原蛋白Ⅰ（12μg/mL）和無菌明膠（0.1%）需要在4℃下保存，1-2周內(nei) 使用，蛋白製品放置過久易失效；
02
選擇包被液用量依據不同培養(yang) 器皿而定，一般確保培養(yang) 器皿底部完-全覆蓋為(wei) 準（並且確保包被時間內(nei) 不幹）；
培養(yang) 器皿 | 用量推薦（僅(jin) 供參考） |
12孔板/孔 | 0.5mL |
6孔板/孔 | 0.8mL |
6cm培養(yang) 皿/皿 | 1-1.5mL |
10cm培養(yang) 皿/皿 | 3mL |
T25瓶/瓶 | 1-1.5mL |
T75瓶/瓶 | 3-4mL |
03
PLL有輕微毒性，膠原蛋白Ⅰ、明膠配置溶劑部分有少量毒性，所以包被後的培養(yang) 器皿，使用前必須用PBS或培養(yang) 基清洗1-3次；
04
細胞爬片等玻璃製品因材質問題，本身吸附能力弱，一般必須包被；
05
包被分為(wei) 包被時間和幹燥時間，包被時間是包被液吸附作用時間，一般按推薦時間即可。幹燥時間是包被後培養(yang) 器皿晾幹時間，是為(wei) 了確保包被液晾幹，達到更好的粘性吸附效果；
06
以上所有操作均以無菌試劑、耗材，無菌環境內(nei) 操作為(wei) 前提。
網站首頁
