SV-HUC-1 (人輸尿管上皮永生化細胞),是由猿猴空泡病毒40轉染至1名11歲男孩的泌尿道上皮細胞,而建立起來的永生化星空体育平台官网网址。其分化特性與(yu) 正常細胞相似,培養(yang) 簡單,可無限傳(chuan) 代,卻不屬於(yu) 腫瘤細胞[1]。
基礎信息
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生長培養(yang) 基:
Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S
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生長特性:貼壁,上皮細胞樣
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推薦傳(chuan) 代比例:1:2-1:4
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推薦換液頻率:2~3次/周
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培養(yang) 條件:
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
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凍存條件:
55% 基礎培養(yang) 基+40%FBS+5%DMSO
SV-HUC-1細胞正常生長
細胞傳(chuan) 代
01
從(cong) 培養(yang) 容器中吸出用過的細胞培養(yang) 基並丟(diu) 棄;
02
用PBS衝(chong) 洗細胞(每10cm2培養(yang) 表麵積約2mL 溶液)。從(cong) 與(yu) 貼壁細胞層相對的容器一側(ce) 輕輕加入衝(chong) 洗液,以避免攪動細胞層,前後輕柔搖晃容器數次;
03
從(cong) 培養(yang) 容器中吸出衝(chong) 洗液並丟(diu) 棄,向培養(yang) 瓶中加入0.25%胰酶(試劑量應足以覆蓋細胞層);
04
輕輕搖晃容器,使試劑*覆蓋細胞層,T25 細胞培養(yang) 瓶留 200μL左右即可;
05
將培養(yang) 容器放在培養(yang) 箱中孵育5分鍾左右,在顯微鏡下觀察細胞解離情況;
06
當細胞解離程度≥ 90%時,傾(qing) 斜培養(yang) 容器,使細胞上液體(ti) 盡快流盡,加入所用胰酶兩(liang) 倍體(ti) 積的*培養(yang) 基,吹打細胞層表麵數次,使培養(yang) 基分散;
07
將細胞轉移到無菌離心管中,以 200×g 的離心力離心 3-5 分鍾;
08
用最少體(ti) 積的*培養(yang) 基重新懸浮細胞沉澱,將細胞懸液按照推薦比例稀釋,並將適量體(ti) 積的細胞懸液轉移到新的細胞培養(yang) 容器中,再將細胞放回培養(yang) 箱。
注意事項
1、待細胞匯合度達到80%-90%時,即可進行傳(chuan) 代培養(yang) ;
2、該細胞較難消化,注意延長消化時間。待消化到細胞收縮變圓,輕拍培養(yang) 瓶側(ce) 邊,細胞可以滑落方可終止消化;
3、如果使用培養(yang) 瓶,在將其放入培養(yang) 箱前,應將瓶蓋旋鬆,以便進行充分的氣體(ti) 交換,除非您使用的是通氣式培養(yang) 瓶和透氣性瓶蓋。
●參考文獻●
[1] 王惠惠, 陳鋒, 朱佳玉, 席淑華, 孫貴範. 亞(ya) 砷-酸鈉對SV-HUC-1細胞NRF2通路影響[J]. 中國公共衛生, 2017, 33(1): 95-97.