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B16係列細胞屬於(yu) 小鼠黑色素瘤星空体育平台官网网址，是源自C57小鼠的一種皮膚癌細胞，常用於(yu) 腫瘤生物學研究。
本期細胞學堂為(wei) 大家整理了B16係列細胞的培養(yang) 方法與(yu) 注意事項，B16細胞黑色素的形成原因及解決(jue) 方法，幫助您快速上手開展實驗。
01
B16係列細胞培養(yang) 方法
培養(yang) 條件
RPMI-1640(PM150110)＋10%FBS(164210-50)＋1%P/S(PB180120)；
生長特性
貼壁生長，生長迅速，能產(chan) 生黑色素；
傳(chuan) 代方式
0.25%含EDTA的胰蛋白酶消化2-3min，推薦傳(chuan) 代比例1:3-1:4；
凍存
推薦凍存密度1-5×106cell/ml。
注意事項
（1）細胞生長速度快，培養(yang) 密度不宜過高，需要及時傳(chuan) 代和換液，細胞密度過高，會(hui) 導致細胞狀態變差，死亡；
（2）細胞內(nei) 含黑色素，在細胞會(hui) 產(chan) 生黑色素，遇到培養(yang) 基顏色變深，消化下來的細胞離心後，沉澱為(wei) 黑褐色或者是灰黑色，此為(wei) 正常現象。
複蘇時細胞沉澱顏色:“灰黑色"（1640培養(yang) 基）
細胞產(chan) 黑色素導致培養(yang) 基變色（1640培養(yang) 基）
細胞產(chan) 黑色素導致培養(yang) 基變色（DMEM培養(yang) 基）
02
黑色素形成原因
該細胞在體(ti) 外培養(yang) 有兩(liang) 種培養(yang) 條件：快速分裂增殖和分化成熟，培養(yang) 基條件不同可改變該細胞的生長狀態，使用RPMI-1640培養(yang) 基可使其快速增殖，而使用DMEM培養(yang) 基能誘導細胞分化成熟並合成黑色素。建議正常擴增凍存請使用RPMI-1640培養(yang) 基，若需要進行分泌黑色素等後續相關(guan) 實驗，可以在擴增凍存細胞後更換為(wei) DMEM培養(yang) 來滿足實驗設計。
需要注意的是，B16細胞對培養(yang) 基條件較為(wei) 敏感，同樣是DMEM或RPMI-1640培養(yang) 基，不同型號、不同廠家的產(chan) 品，其具體(ti) 成分的少許差異都有可能改變B16係列細胞的生長狀態。在實驗時應慎重選擇培養(yang) 基，培養(yang) 時最好是保持和購買(mai) 細胞的廠家同一型號的培養(yang) 基，以保證細胞的性狀穩定。
更換培養(yang) 條件，比如由RPMI-1640更換成DMEM會(hui) 導致黑色素大量形成，細胞培養(yang) 基變黑，但若穩定培養(yang) 時未更換培養(yang) 基，出現培養(yang) 基突然變黑的情況，有可能是以下幾個(ge) 原因引起的：
1
細胞死亡
如果細胞在培養(yang) 過程中出現大量細胞死亡，細胞的代謝產(chan) 物和細胞碎片可能會(hui) 導致培養(yang) 基變黑。這可能是由於(yu) 細胞因狀態變差、汙染或其他因素引起的。
2
細胞汙染
如果培養(yang) 基中出現汙染（細菌、真菌、支原體(ti) 、黑膠蟲等），這些微生物的生長和代謝產(chan) 物可能導致培養(yang) 基變黑。
03
客戶B16-F10細胞實驗經驗分享
(以下為(wei) 客戶實戰經驗分享，僅(jin) 做參考)
01
為(wei) 了保證B16-F10細胞的活性，通常在傳(chuan) 代時盡可能控製胰酶的溫度及消化時間，關(guan) 注B16-F10細胞的消化狀態（顯微鏡下看到細胞明顯分離變圓，側(ce) 立培養(yang) 瓶細胞可以滑落時可終止消化）。消化過度導致B16-F10細胞損傷(shang) 、活性下降。尤其是在進行黑色素合成、分泌和酪氨酸酶活性等相關(guan) 實驗時，更需注意胰酶的消化時間，細胞的消化狀態。
02
使用光線對B16-F10細胞進行輻照處理時，有兩(liang) 點值得關(guan) 注的地方：
（1）光照時須打開培養(yang) 皿蓋，以確保光線照射在B16-F10細胞上，而非被培養(yang) 皿蓋折射與(yu) 吸收；
（2）輻照前，需要將培養(yang) 基換成無酚紅的RPMI-1640完-全培養(yang) 基。避免酚紅對光線的吸收作用，影響試驗結果。
04
B16係列細胞的常見應用
1
黑色素瘤生物學研究
B16星空体育平台官网网址可以用於(yu) 黑色素瘤的發生、發展和轉移機製的研究。通過模擬黑色素瘤細胞在體(ti) 內(nei) 的行為(wei) ，探索細胞增殖、遷移、侵襲、轉移等過程。
2
腫瘤藥物篩選
B16細胞在體(ti) 外培養(yang) 中可以用於(yu) 篩選和評估抗黑色素瘤藥物的療效。通過將藥物添加到培養(yang) 基中，研究藥物對細胞增殖、凋亡、侵襲、轉移等生物學行為(wei) 的影響，以評估其抗腫瘤活性。
3
免疫治療研究
B16細胞可以用作免疫治療研究的模型。例如，可以將免疫刺激劑或免疫檢查點抑製劑添加到培養(yang) 基中，研究它們(men) 對細胞免疫應答和腫瘤生長的影響，以評估其在黑色素瘤治療中的潛力。
4
黑色素瘤轉移研究
B16細胞的轉移能力是其研究的重要方麵。可以通過將細胞注射到小鼠的血液循環或特定的器官中，研究黑色素瘤細胞的遷移和轉移機製，以及針對轉移的治療策略。
5
細胞信號傳(chuan) 導研究
B16細胞可以用於(yu) 研究細胞信號傳(chuan) 導通路在黑色素瘤發生和發展中的作用。例如，可以通過轉染或抑製特定的信號分子或途徑，研究其對細胞增殖、凋亡、侵襲等生物學行為(wei) 的影響。
注意：
B16係列細胞雖然在黑色素瘤研究中被廣泛使用，但其在體(ti) 外培養(yang) 中仍然存在一些局限性，如與(yu) 體(ti) 內(nei) 環境的差異、細胞株的異質性等。因此，在研究中需要綜合使用其他模型和方法，以更好地模擬和了解黑色素瘤的生物學特性。
●參考文獻●
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