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細胞學堂 | 實驗室細胞計數指南

更新時間:2023-12-19  |  點擊率:1417
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細胞計數是實驗室中常見的一項操作,用於(yu) 確定樣品中細胞的數量,判斷細胞數量是否滿足實驗需求。本期細胞學堂為(wei) 大家整理了幾種常見的計數方法:人工手動計數法、自動細胞計數儀(yi) 法,以及懸浮細胞和貼壁細胞在不同密度下的鏡下視野的參考範圍,幫助您快速上手開展實驗。




1

人工手動計數法


即通過肉眼觀察顯微鏡視野中的細胞數量,從(cong) 而進行統計。

  操作步驟   

1

將計數板及蓋玻片擦拭幹淨,並將蓋玻片蓋在計數板上;

2

輕輕吹打細胞懸液,使細胞均勻分布;吸出10μL-20μL左右的細胞懸液滴在蓋片邊緣,使細胞懸液充滿蓋玻片和計數板之間;

3

靜置1min-2min,使細胞沉降;注意玻片下不要有氣泡,也避免細胞懸液進入旁邊的槽中

4

在顯微鏡下對A/B/C/D四個(ge) 大格內(nei) 的細胞進行計數,壓在大格四周邊線上的細胞隻計數壓在2條邊線上的細胞(如左側(ce) 和上方);若鏡下有2個(ge) 細胞組成的細胞團,則應按單個(ge) 細胞計算;若細胞團數量較多,占細胞總量的10%左右,則說明細胞分散不好會(hui) 導致計算不準確,需要重新製備細胞懸液,細胞量較多的時候,需要借助計數器;

5

按公式計數細胞數量:細胞數/mL=四個(ge) 大格內(nei) 細胞總數(每個(ge) 大格共計16個(ge) 小格)×104/4


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2

自動細胞計數儀(yi) 法


即通過儀(yi) 器進行計數,例如血細胞計數儀(yi) 或顯微鏡配備的圖像分析係統。這些設備能夠自動識別和計數細胞,提高計數的準確性和效率。

  操作步驟   

1

將計數板及蓋玻片擦拭幹淨,並將蓋玻片蓋在計數板上;

2

輕輕吹打細胞懸液,使細胞均勻分布;吸出少許細胞懸液滴在蓋片邊緣,使細胞懸液充滿蓋玻片和計數板之間;

3

靜置1min-2min,使細胞沉降;注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細胞懸液進入旁邊的槽中

4

將計數板放置在儀(yi) 器中,按要求設置參數,儀(yi) 器自動計數;

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3

基於(yu) 鏡下密度估計細胞密度


在實際細胞培養(yang) 過程中,若沒有計數條件或者對於(yu) 細胞數量不要求定量,也可基於(yu) 肉眼去觀察鏡下的細胞密度去估計細胞是否可以傳(chuan) 代。以下是懸浮細胞和貼壁細胞不同密度下的鏡下視野可以給大家作為(wei) 參考。(需要注意的是,不同大小的細胞,密度值是有差異的,這裏列舉(ju) 的是較常見的例子)

  01 貼壁細胞的密度參考     

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顯微鏡下不同密度的貼壁細胞

  02 懸浮細胞的密度參考     

懸浮細胞接種到T25的瓶子裏混勻後,在顯微鏡下靜置3min-5min後,拍照得到:(懸浮細胞在移動的時候,細胞會(hui) 像向中間移動,導致密度不均)

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K562細胞混勻靜置3~5分鍾後拍照(100X拍攝)


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K562細胞混勻靜置3~5分鍾後拍照(200X拍攝)






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