細胞學堂 | A-498細胞知識盤點

本期細胞學堂為(wei) 大家整理了A-498細胞的培養(yang) 條件與(yu) 傳(chuan) 代、凍存步驟及常見應用，幫助您快速上手開展實驗。

A498細胞貼壁生長，呈上皮樣形態，細胞鋪開麵積大，單位麵積細胞總數量少，少量細胞有觸角；

低密度時可觀察到單個(ge) 細胞清晰的邊緣，密度大於(yu) 100%時邊緣不清晰，細胞與(yu) 細胞之間沒有間隙；

細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) ；

棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次；

加1mL胰酶（含0.25% EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化2-3min，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓、分離並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化；

按3-4mL/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4min，棄去上清液，補加2-3mL培養(yang) 液後吹勻；

收到細胞後首-次傳(chuan) 代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的已添加好新鮮培養(yang) 基的皿中或者瓶中，傳(chuan) 代後每個(ge) T25培養(yang) 液總體(ti) 積是5-6mL，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2到1:4的比例進行。

有血清程序凍存（需梯度降溫）：

配置凍存液，凍存液推薦配比：55%（基礎培養(yang) 基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；

製備好的細胞懸液計數，計算總細胞量；

細胞離心後盡量吸幹淨上清，離心轉速1200rpm（250g）3min；

加入配置好的凍存液重懸，調整細胞濃度為(wei) 3×10⁶~1×10⁷cells/mL；

分裝入凍存管，一個(ge) 凍存管分裝1~1.5mL；

推薦使用程序降溫盒，分裝好的凍存管轉入程序降溫盒後直接放入-80℃冰箱過夜；

從(cong) -80℃冰箱取出凍存管迅速轉移到液氮長期保存。