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培養(yang) BV2細胞時，最常遇到的問題就是細胞形態異常，通常伴隨著細胞形狀改變、拉絲(si) 較多等，對大家的實驗造成影響。本期細胞學堂為(wei) 大家整理了BV2細胞的培養(yang) 方法、常見問題及處理方法，幫助您快速上手開展實驗。
細胞生長特性
① 半貼半懸：懸浮和貼壁細胞比例不固定；
② 多形性：懸浮細胞為(wei) 圓形，貼壁細胞既有圓形（飽滿圓潤，邊緣亮）也有梭形（向兩(liang) 端伸出黑色突起）、多邊形。
BV2細胞顯微鏡圖
培養(yang) 方法
BV2細胞的傳(chuan) 代
01
用移液器吸出細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 液（含有懸浮細胞），轉移到無菌離心管A中；
02
用1 mL PBS潤洗細胞，吸出PBS放入到上一步裝有培養(yang) 液的離心管A中；
03
培養(yang) 瓶中加入1 mL胰酶，輕輕晃動培養(yang) 瓶使胰酶浸潤所有細胞，放入37℃培養(yang) 箱靜置消化（消化時間跟據細胞生長時間稍有不同，消化時間一般為(wei) 2~4 min，可以消化1 min後拿出來在顯微鏡下觀察，若還未消化完-全就放回培養(yang) 箱繼續消化，直到顯微鏡下看到細胞明顯分離變圓，側(ce) 立培養(yang) 瓶細胞有滑落跡象，可終止消化），全程不要拍打培養(yang) 瓶；
04
培養(yang) 瓶中加入3 mL含血清的培養(yang) 基終止消化，輕輕吹幾下將細胞吹落到液體(ti) 中，再輕吹5~10下使細胞均勻分散，盡量在顯微鏡下呈單顆懸浮；
05
將培養(yang) 瓶中的細胞懸液轉移至離心管A中，1200 rpm離心3 min；
06
棄上清，加入2~3 mL新鮮培養(yang) 基重懸沉澱，按傳(chuan) 代比例分裝到新的培養(yang) 瓶或者皿中，補足培養(yang) 基，最後輕吹幾下讓細胞分散均勻。
注意事項
BV2細胞是半貼壁半懸浮細胞，懸浮細胞和貼壁細胞的比例不固定，因此傳(chuan) 代的時候需要單獨收集懸浮和貼壁部分的細胞進行處理。如果懸浮的細胞不到10%，貼壁的細胞密度有80%以上，這個(ge) 情況傳(chuan) 代的時候也可以不收集懸浮細胞。
BV2細胞的凍存
凍存液推薦配比：
55%（基礎培養(yang) 基）+40%(血清)+5%（DMSO）或90%胎牛血清+10%DMSO；
注意事項
細胞到貨穩定培養(yang) 2~3代後，建議及時凍存保種，推薦凍存密度2~3×106 cells/mL。由於(yu) 細胞凍存成功率往往無法達到百分-之百，一般建議邊傳(chuan) 代邊凍存，每次凍存後需複蘇一支凍存管驗證細胞活率。
培養(yang) 常見問題及處理方法
01
剛收到貨時，細胞整體(ti) 偏圓形較多，而後續培養(yang) 時梭形較多是怎麽(me) 回事？
細胞形態會(hui) 隨著密度的改變發生變化。BV2細胞增殖較快，到貨時由於(yu) 運輸震蕩的原因，部分細胞會(hui) 出現收縮，此時細胞密度較高，圓形相對較多；在後續培養(yang) 中，按照1:2~1:4傳(chuan) 代24 h時，細胞主要以梭形為(wei) 主；後續隨著細胞密度越來越高，圓形細胞會(hui) 逐漸變多。
02
傳(chuan) 代培養(yang) 時，發現細胞拉絲(si) 、觸角較多，如何調整？
BV2細胞以較低密度傳(chuan) 代後，容易出現拉絲(si) 、觸角較多的情況。這種情況可以先收集培養(yang) 基中懸浮或貼壁不牢的細胞於(yu) 15 mL離心管中，貼壁的細胞用胰酶消化1 min左右後終止消化，收集消化下來的的細胞（多觸角或者拉絲(si) 很長的細胞，短時消化不容易消化下來，可以被篩掉），然後計數傳(chuan) 代，培養(yang) 一段時間後細胞狀態會(hui) 有好轉。沒有消化下來的細胞也可以提高細胞密度傳(chuan) 代，重複此步驟，收集偏圓形的細胞培養(yang) 。
03
培養(yang) 過程梭型細胞比圓形細胞多，梭型是不是細胞分化了？
細胞受到LPS刺激後易分化，而常規培養(yang) 過程是不會(hui) 自發分化的。關(guan) 於(yu) 哪種形態是分化，並沒有統一的定論，有的文獻描述分化細胞是長梭型細胞增加，有的文獻稱分化細胞偏圓形，建議通過檢測相關(guan) 的指標變化來判斷是否分化。
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