細胞學堂 | 細胞又雙叒叕聚團了？解決攻略來了！

細胞本身特性

對於(yu) 初次接觸細胞培養(yang) 的新手來說，他們(men) 可能對懸浮細胞的理解局限於(yu) 細胞以單顆獨立的狀態懸浮於(yu) 培養(yang) 基中。但實際上，有一類懸浮細胞，它們(men) 由於(yu) 自身的生長特性，常會(hui) 以聚團的形式生長。例如，AtT-20細胞在正常生長過程中，會(hui) 自然以聚大團的形式懸浮生長（如圖1所示）；而U2932細胞常以聚小團的形式懸浮生長（如圖2所示）。對於(yu) 此類細胞，在初次培養(yang) 時，建議參照權-威數據庫細胞正常生長圖片，了解並熟悉其易聚團生長的特性，無需做特殊處理。

細胞受到刺激

在培養(yang) 貼壁不牢的細胞（如HEK 293係列）時，若細胞受到外界刺激（如換液時未預熱培養(yang) 基、PBS或細胞受到震蕩等），可能會(hui) 導致細胞脫落，聚團漂浮。另外，如購買(mai) 細胞時選擇常溫運輸發貨，細胞在到貨時也可能出現脫落，聚團漂浮的情況。針對此類問題，可以通過收集聚團漂浮的細胞，經過適當消化後，重新接種進行培養(yang) 。

大鼠背根神經元細胞是一株貼壁生長的細胞，在常溫運輸過程中同樣可能因為(wei) 運輸刺激，導致細胞聚團漂浮（如圖5所示）。在高倍鏡下觀察細胞團塊，大部分細胞是透亮光滑的（若不確定聚團細胞的存活狀態，可將細胞團消化成細胞懸液，用台盼藍染色判斷死活細胞的比例），收集聚團細胞後用胰酶消化，重新鋪板，經過24 h的培養(yang) ，細胞開始貼壁，形態逐漸伸展開，繼續培養(yang) 2天後，細胞形態恢複正常。

圖5. 大鼠背根神經元細胞常溫運輸後的聚團處理

消化不當

在貼壁細胞的傳(chuan) 代過程中，消化不當與(yu) 傳(chuan) 代後細胞聚團生長的現象密切相關(guan) 。如果消化液的濃度過高或消化時間過長，細胞可能會(hui) 受損，其正常的粘附能力會(hui) 受到影響，進而容易導致細胞聚團。相反，如果消化時間過短，貼壁細胞隻是大片地從(cong) 培養(yang) 皿底部脫落，而細胞間的粘附仍然較強。此時即便使用移液槍輕柔吹打，也難以將細胞團塊分散成單細胞懸液。這種消化不足的細胞懸液接種的細胞更易傾(qing) 向於(yu) 聚團生長。

為(wei) 了應對因消化不當導致的細胞聚團問題，我們(men) 需要對培養(yang) 的細胞消化時間進行更為(wei) 精準的掌控。既要確保細胞能夠充分解離，又要避免對細胞狀態造成影響。如果在傳(chuan) 代後發現細胞呈現聚團生長，且細胞狀態良好的前提下，可以將細胞進行消化處理，以獲得單細胞懸液並重新進行接種鋪板。

血清影響

不同品牌的血清在成分上存在差異，尤其是生長因子的含量，這種差異可能會(hui) 對細胞的粘附能力和生長狀態產(chan) 生影響，進而引發細胞聚團的現象。此外，即使是同一品牌的不同批次血清，也可能因質量波動而對細胞狀態產(chan) 生影響，使細胞更容易聚集。因此，在培養(yang) 對血清敏感的細胞時，應盡量避免更換血清品牌和生產(chan) 批次。如果確實需要更換血清，建議采取逐步替換的方式，這樣可以顯著提高血清替換的成功率，並降低細胞生長過程中出現聚團的風險。